BspQI
BspQI kin rekombinant útdrukt wurde yn E. coli dat kin werkenne spesifike siden en wurde produsearre ûnder
BspQI, in IIs beheining endonuclease beheining endonuclease, is ôflaat fan in rekombinante E. coli stam dy't draacht de cloned en modifisearre BspQI gen út Bacillus sphaericus.It kin spesifike siden werkenne, en herkenningssekwinsje en splitsingsplakken binne as folget:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · ·
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Produkteigenskippen
1. Hege aktiviteit, Fast spiisfertarring;
2. Lege stjeraktiviteit, it garandearjen fan krekte cutting lykas "skalpel";
3. Sûnder BSA en bist-oarsprong frij;
Methylaasje gefoelichheid
Dmethylaasje:Net gefoelich;
Dcm methylaasje:Net gefoelich;
CpG-methylaasje:Net gefoelich;
Opslach betingsten
It produkt moat wurde ferstjoerd ≤ 0 ℃;Bewarje by -25 ~ - 15 ℃ steat.
Opslach buffer
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml rekombinant albumine, 0, 1% Trition X-100 en 50% glycerol (pH 7,0 @ 25 ° C).
Unit Definition
Ien ienheid wurdt definiearre as de hoemannichte enzyme nedich om 1 µg fan ynterne kontrôle DNA yn 1 oere by 50 ° C te fertarren yn in totaal reaksjevolumint fan 50 µL.
Kwaliteitsbeweitsing
Protein Purity Assay (SDS-PAGE):De suverens fan BspQI wie ≥95% bepaald troch SDS-PAGE-analyze.
RNase:10U BspQI mei 1.6μg MS2 RNA foar 4 oeren by 50 ℃ jout gjin degradaasje lykas bepaald troch agarosegelelektroforese.
Net-spesifike DNase-aktiviteit:10U fan BspQI mei 1μg λ DNA by 50 ℃ foar 16 oeren, fergelike mei 50 ℃ foar 1 oere, jout gjin oerstallige DNA lykas bepaald troch agarosegelelektroforese.
Ligaasje en recutting:Nei digestion fan 1 μg λDNA mei 10U BspQI, kinne DNA-fragminten wurde ligearre mei T4 DNA-ligase by 16ºC.En dizze ligearre fragminten kinne wurde opnij mei BspQI.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-spesifike TaqMan qPCR-deteksje liet sjen dat E.coli-genoomresidinsje ≤ 0.1pg / ul.
Hostproteinrest:≤ 50 ppm
Baktearje Endotoxine: LAL-test, neffens Sineeske Pharmacopoeia IV 2020-edysje, gellimyttestmetoade, algemiene regel (1143).De ynhâld fan bakteriële endotoxine moat ≤10 EU/mg wêze.
Reaksjesysteem en betingsten
| Komponint | Folume |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μl |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μl |
| dd H2O | Oant 50 μL |
Reaksje betingsten: 50 ℃, 1~16 h.
Heat inactivation: 80 ° C foar 20 min.
It oanrikkemandearre reaksjesysteem en betingsten kinne in relatyf goed enzyme-spijsverteringseffekt leverje, wat allinich foar referinsje is, ferwize asjebleaft nei de eksperimintele resultaten foar details.
Produkt applikaasje
Beheining endonuclease spiisfertarring, Rapid cloning.
Notysjes
1. It folume fan enzyme ≤ 1/10 fan it reaksje folume.
2. Star aktiviteit kin foarkomme as glycerol konsintraasje is mear as 5%.
3. Cleavage aktiviteit kin foarkomme as Substrate ûnder de rekommandearre ferhâlding.
