CHO HCP ELISA Kit
In ien-stap immunosorbent ELISA metoade wurdt brûkt yn dizze assay.Samples dy't CHOK1 HCP befetsje, reagearje tagelyk mei HRP-labele geit-anti-CHOK1-antybody en anty-CHOK1-antylodyk bedekt op 'e ELISA-plaat, en foarmje úteinlik in sandwichkompleks fan fêste-fase antykodym-HCP-labele antykodym.Unbûn antigeen-antilichaam kin fuortsmiten wurde troch it waskjen fan de ELISA-plaat.De TMB substraat wurdt tafoege oan de put foar genôch reaksje.De kleurûntwikkeling wurdt stoppe nei it tafoegjen fan 'e stop-oplossing, en de OD of absorbânsjewearde fan' e reaksje-oplossing by 450/650nm wurdt lêzen mei in mikroplatelêzer.De OD-wearde as absorbânsjewearde is evenredich mei de HCP-ynhâld yn 'e oplossing.Hjirfan kin de HCP-konsintraasje yn 'e oplossing wurde berekkene neffens de standertkromme.
Oanfraach
Dizze kit wurdt brûkt om de ynhâld fan CHOK1-hostselproteïneresten yn samples kwantitatyf te detektearjen.
Componenten
| S/N | Komponint | Konsintraasje | Storage Betingsten |
| 1 | CHOK1 HCP Standert | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃, beskermje tsjin ljocht |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, beskermje fan ljocht |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Stopje oplossing | NA | RT |
| 6 | Microplate sealers | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Hege adsorpsje pre-coating Platen | NA | 2-8℃ |
Equipment Required
| Verbruiksartikelen / Equipment | Manufacture | Katalogus |
| Microplate lêzer | Molekulêre apparaten | Spectra Max M5, M5e, of lykweardich |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, of lykweardich |
| Vortex mixer | IKA | MS3 Digital, of lykweardich |
Opslach en stabiliteit
1.Ferfier by -25~-15°C.
2.Storage betingsten binne lykas werjûn yn tabel 1;komponinten 1-2 wurde opslein ≤–20 °C, 5-6 wurde opslein RT,3、4, 7, 8 wurde opslein by 2-8 ℃;de jildichheid perioade is 12 moannen.
Produkt parameters
1.Gefoelichheid: 1 ng/ml
2.Deteksjeberik: 3-100ng/ml
3.Precision: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.HCP-dekking: >80%
5.Spesifisiteit: Dizze kit is universeel, om't it spesifyk reagearret mei CHOK1 HCP ûnôfhinklik fan suveringsproses.
Reagens tarieding
1.PBST 0.05%
Nim 15 ml fan 20 × PBST 0,05%, verdund yn ddH2O, en makke oant 300 ml.
2.1,0% BSA
Nim 1 g fan BSA út 'e flesse en ferdylgje yn 100 ml PBST 0,05%, mingje goed oant folslein oplost, en bewarje by 2-8 ° C.De tariede verdunningsbuffer is jildich foar 7 dagen.It is oan te rieden om te tarieden as nedich.
3.Detection oplossing 2μg/mL
Nim 48μL fan 0.5 mg / mL Anti-CHO HCP-HRP en ferdylgje yn 11,952μL fan 1% BSA om in definitive konsintraasje fan 2μg / mL deteksjeoplossing te krijen.
4.QC en Tarieding fan CHOK1 HCP Standards
| Tube Nee. | Oarspronklik | Konsintraasje | Folume | 1% BSA | totale Volume | Finale |
| A | Standert | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabel: Tarieding fan QC en noarmen
Assay proseduere
1.Tariede de reagents lykas oanjûn yn "Reagent Preparation" hjirboppe.
2.Nim 50μL fan noarmen, samples en QC's (ferwize nei Tabel 3) yn elke put, foegje dan 100μL fan Detection-oplossing (2μg / mL);Cover plaat mei sealer, en plak de ELISA plaat op 'e thermomixer.Inkubearje by 500 rpm, 25 ± 3 ℃ foar 2 oeren.
3.Ynvertearje de mikroplaat yn 'e sink en smyt de coating oplossing.Pipetteer 300μL PBST 0.05% yn elke put om de ELISA-plaat te waskjen en de oplossing te ferwiderjen, en werhelje it waskjen 3 kear.Werje de plaat op in skjinne papierhúske en pat droech.
4.Foegje 100μL fan TMB-substrat (sjoch Tabel 1) ta oan elke put, fersegelje de ELISA-plaat, en ynkubearje yn it tsjuster by 25 ± 3 ℃ foar 15 min.
5.Pipetteer 100μL stopoplossing yn elke put.
6.Meet absorption by golflingte fan 450/650nm mei mikroplaatlêzer.
7.Analysearje gegevens troch SoftMax of lykweardige software.Plot standert kromme mei help fan in fjouwer-parameter logistyk regression model.
Standert Curve Foarbyld
OPMERKING: As de konsintraasje fan HCP yn 'e stekproef de boppegrins fan' e standertkromme grutter is, moat it goed wurde verdund mei verdunningsbuffer foar it testen.
OPMERKINGEN
De stopoplossing is 2M sulfuric acid, behannelje asjebleaft foarsichtich om spatten te foarkommen!
