DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) is in endodeoxyribonuclease dy't ien- of dûbelstrenged DNA kin fertarje.It herkent en knipt phosphodiester-obligaasjes om monodeoxynucleotides of single- of double-stringed oligodeoxynucleotides te meitsjen mei fosfaatgroepen oan 'e 5'-terminal en hydroxyl by de 3'-terminal.De aktiviteit fan DNase I hinget ôf fan Ca2+ en kin aktivearre wurde troch divalente metaalionen lykas Mn2+ en Zn2+.5mM Ca2+ beskermet it enzyme fan hydrolyse.Yn 'e oanwêzigens fan Mg2+ koe it enzym willekeurich elke side op elke DNA-string werkenne en spjalte.Yn 'e oanwêzigens fan Mn2+ kinne de dûbele stringen fan DNA tagelyk erkend wurde en op hast deselde side wurde knipt om platte ein-DNA-fragminten of kleverige ein-DNA-fragminten te foarmjen mei 1-2 nukleotiden dy't útstekke.
Produkt Property
Bovine Pancreas DNase I waard útdrukt yn gist ekspresje systeem en suvere.
Componenten
| Komponint | Folume | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-frij | 20 μL | 200 μL | 1ml | 10 ml |
| 10 × DNase I Buffer | 1ml | 1ml | 5x 1ml | 5x10ml |
Ferfier en opslach
1. Storage Stability: - 15 ℃ ~ -25 ℃ foar opslach;
2.Transport Stabiliteit: Ferfier ûnder iispakken;
3. Oanlevere yn: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glycerol, pH 7.6 by 25 ℃.
Unit Definition
Ien ienheid wurdt definiearre as de hoemannichte enzyme dy't 1 µg pBR322 DNA yn 10 minuten by 37 ° C folslein degradearje sil.
Kwaliteitsbeweitsing
RNase:5U fan DNase I mei 1.6 μg MS2 RNA foar 4 oeren by 37 ℃ jout gjin degradaasje lykas bepaald troch agarosegelelektroforese.
Baktearje Endotoxine:LAL-test, neffens Sineeske Pharmacopoeia IV 2020-edysje, gellimyttestmetoade, algemiene regel (1143).De ynhâld fan bakteriële endotoxine moat ≤10 EU/mg wêze.
Ynstruksjes foar gebrûk
1.Treidzje de reaksje oplossing yn 'e RNase-frije buis neffens de ûndersteande ferhâldingen:
| Komponint | Folume |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μl |
| DNase I, RNase-frij (5U/μL) | 1 U per μg RNA |
| ddH2O | Oant 10 μL |
2,37 ℃ foar 15 minuten;
3.Foegje de beëinigingsbuffer ta om de reaksje te stopjen, en waarmje op 65 ℃ foar 10 minuten om DNase I te ynaktivearjen. De stekproef kin direkt brûkt wurde foar it folgjende transkripsje-eksperimint.
Notysjes
1.Gebrûk 1U DNase I per μg RNA, of 1U DNase I foar minder dan 1μg RNA.
2.EDTA moat tafoege wurde oan in definitive konsintraasje fan 5 mM om RNA te beskermjen fan ôfbrutsen tidens enzyme-ynaktivaasje.
