Ultra Nuclease
UltraNuclease is in genetysk manipulearre endonuclaese ôflaat fan Serratia marcescens, dy't yn steat is om DNA of RNA te degradearjen, itsij dûbel- as ienstrengich, lineêr as sirkulêr ûnder in breed oanbod fan betingsten, folslein degradearje nukleïnesoeren yn 5'-monofosfaat oligonucleotides mei 3-5 basenlange .Nei modifikaasje fan genetyske technyk waard it produkt fermentearre, útdrukt en suvere yn Escherichia coli (E. coli), wat de viskositeit fan sel supernatant en sel lysate wittenskiplik ûndersyk ferminderet, mar ek de suveringseffisjinsje en funksjoneel ûndersyk fan proteïne ferbetterje.It kin ek brûkt wurde yn 'e gen-terapy, firus suvering, faksin produksje, proteïne en polysaccharide farmaseutyske yndustry as gasthear residu nucleic acid ferwidering reagens.
Produkteigenskippen
| CAS nr. | 9025-65-4 |
| EK nr. | |
| Molekuul gewicht | 30 kDa |
| Isoelektrysk punt | 6.85 |
| Protein Purity | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Spesifike aktiviteit | ≥1.1 × 106 U/mg |
| Optimale temperatuer | 37°C |
| Optimale pH | 8.0 |
| ProteaseActivity | negatyf |
| Bioburden | ＜10CFU/100.000U |
| Residual Host-cell Protein | ≤10 ppm |
| Heavy Metal | ≤10 ppm |
| Bakteriële endotoxine | ＜0.25EU/1000U |
| Opslachbuffer | 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glycerol |
Opslach betingsten
≤0 °C ferfier；-25~-15 °C Opslach, 2 jier jildigens (foarkom befriezing-ûntdooijen).
Unit Definition
De hoemannichte enzyme brûkt om de absorptionwearde fan △A260 te feroarjen troch 1.0 binnen 30min by 37 °C, pH 8.0, lykweardich oan digested 37μg salm sperma DNA troch te snijen yn oligonucleotides, waard definiearre as in aktive ienheid (U).
Kwaliteitsbeweitsing
Residual Host-cell Protein: ELISA kit
•Protease Residuen: 250KU / mL UltraNuclease reagearre mei substraat foar 60min, gjin aktiviteit waard ûntdutsen.
•Bakteriële endotoxine: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China Volume 4 (2020 Edition) gellimyttestmetoade.Algemiene regels (1143).
•Bioburden: Pharmacopoeia of the People's Republic of China Volume 4 (2020 Edition) - Algemien
Regels foar Sterility Test (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Heavy Metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operaasje
UltraNuclease-aktiviteit waard signifikant ynhibeare as SDS-konsintraasje mear as 0.1% wie as EDTA
konsintraasje wie mear as 1mM.Surfactant Triton X-100, Tween 20 en Tween 80 hiene gjin effekt op nuklease
eigenskippen doe't de konsintraasje ûnder 1,5% wie.
| Operaasje | Optimale operaasje | Jildich operaasje |
| Temperatuer | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-Mercaptoethanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Monovalent metaal ion (Na+, K+ ensfh.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Gebrûk en Dosearring
• Fuortsmite exogenous nucleic acid út faksin produkten, ferminderje it risiko fan oerbleaune nucleic acid toxicity en ferbetterjen produkt feilichheid.
• Ferminderje de viskositeit fan fiedingsflüssigens dy't feroarsake wurdt troch nukleinsäure, ferkoarte ferwurkingstiid en ferheegje proteïne-opbringst.
• Fuortsmite de nucleic acid dy't ferpakt dieltsje (firus, inclusion lichem, ensfh), Dat is befoarderlik
foar de frijlitting en suvering fan it partikel.
| Eksperimintele Type | Protein produksje | Virus, faksin | Seldrugs |
| Sellen nûmer | 1g sel wiet gewicht (resuspended mei 10ml buffer) | 1L fermentaasje floeibere supernatant | 1L kultuer |
| Minimum Dosage | 250U | 100U | 100U |
| Oanrikkemandearre Dosage | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nuclease behanneling kin ferbetterje de resolúsje en herstel fan de stekproef foar kolom chromatography, electrophoresis en blotting analyze.
• Yn gen-terapy wurdt nukleinsäure fuortsmiten om suvere adeno-assosjearre firussen te krijen.
