DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
Cat No: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) is in endodeoxyribonuclease dy't ien- of dûbelstrenged DNA kin fertarje.It herkent en knipt phosphodiester-obligaasjes om monodeoxynucleotides of single- of double-stringed oligodeoxynucleotides te meitsjen mei fosfaatgroepen oan 'e 5'-terminal en hydroxyl by de 3'-terminal.De aktiviteit fan DNase I hinget ôf fan Ca2+en kin aktivearre wurde troch divalente metaalionen lykas Mn2+en Zn2+.5 mM Ca2+beskermet it enzyme fan hydrolyse.Yn it bywêzen fan Mg2+, koe it enzym willekeurich werkenne en spjalte elke side op elke DNA-streng.Yn it bywêzen fan Mn2+, kinne de dûbele stringen fan DNA tagelyk erkend wurde en op hast deselde side knipt wurde om platte ein DNA-fragminten of kleverige ein-DNA-fragminten te foarmjen mei 1-2 nukleotiden dy't útstekke.
Components
| Namme | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-frij | 20 μL | 200 μL | 1ml | 10 ml |
| 10 × DNase I Buffer | 1ml | 1ml | 5x1ml | 5 × 10 ml |
Opslach betingsten
-25 ℃ ~ -15 ℃ foar opslach;Ferfier ûnder iispakken.
Ynstruksjes
1. Bereid de reaksje oplossing yn 'e RNase-frije buis neffens de ûndersteande ferhâldingen:
| Komponint | Folume |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μl |
| DNase I, RNase-frij (5U/μL) | 1 U per µg RNA① |
| ddH2O | Oant 10μL |
Opmerking: ①Berekkenje it folume fan DNase I dat moat wurde tafoege basearre op it bedrach fan RNA.
2. 37 ℃ foar 15 minuten;
3. Foegje 0.5M EDTA ta oan 'e definitive konsintraasje fan 2.5mM ~ 5mM, en waarmje op 65 ℃ foar 10 minuten om de reaksje te stopjen.It stekproef kin direkt brûkt wurde foar de folgjende reaksje, lykas omkearde transkripsjeeksperimint.
Unit Definition
Ien ienheid wurdt definiearre as de hoemannichte enzyme dy't 1 µg pBR322 folslein degradearje silDNA yn 10 minuten by 37 ℃.
Kwaliteitsbeweitsing
RNase:5U fan DNase I mei 1.6µg MS2 RNA foar 4 oeren by 37 ℃ jout gjin degradaasje asbepaald troch agarosegelelektroforese.
Notysjes
1. Tariede asjebleaft 0.5MEDTA troch josels.
2. Brûk 1U DNase I per µg RNA.As it RNA lykwols minder is dan 1µg, brûk dan asjebleaft 1U DNase I.
3. Pleats it enzym asjebleaft op iis by operaasje.
