Superstart qPCR Premix plus-UNG
Cat No: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG is in spesjalisearre reagens ûntworpen foar Real Time PCR kwalitative en kwantitative reaksjes mei help fan probe-basearre deteksje, spesifyk ûntwikkele foar lyophilization prosessen.It befettet in nij hot-start enzyme Hotstart Taq plus (DG), dat har Taq-enzymeaktiviteit fersegele hat by keamertemperatuer, effektyf ynhibearjen fan net-spesifike amplifikaasje feroarsake troch primer-net-spesifike annealing of primer-dimerfoarming ûnder lege temperatuerbetingsten, en sa ferbetterjen de spesifisiteit fan 'e amplifikaasjereaksje.Dit reagens brûkt in optimalisearre qPCR-spesifike buffer en UNG / dUTP anty-kontaminaasjesysteem om rappe hot-starting te berikken, en de effisjinsje en gefoelichheid fan qPCR-reaksjes sterk ferbetterje.It kin goede standertkurven krije yn in breed oanbod fan kwantifikaasjegebieten en kwantifikaasje sekuer útfiere, effektyf foarkommen fan falske positive amplifikaasje feroarsake troch residuele PCR-produkten as aerosolkontaminaasje.Dit reagens is kompatibel mei de measte fluorescent kwantitative PCR-ynstruminten fan fabrikanten lykas Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad en Roche ensfh., en fertoant goede stabiliteit yn lyofilisearre foarm.
Reagent komposysje
1. 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+fergees) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lyoprotectant (opsjoneel)
Storage Betingsten
Opslach op lange termyn by -20 ℃;kin wurde opslein by 4 ℃ oant 3 moannen.Mix goed foar gebrûk enfoarkom werhelle befriezing en thawing.
Cycling Protokol
| Proseduere | Temp. | Tiid | Syklus |
| Digestion | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Aktivearring fan polymerase | 95 ℃ | 1~5 min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Annealing en útwreiding | 56 ~ 64 ℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Systam Tarieding
|
Gearstalling |
25µL Volume |
50µL Volume |
Finale konsintraasje |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG(Mg2+fergees) (DG) | 5 µl | 10 µL | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4,5 mM |
| 4 × lyoprotectant1 | 6.25µL | 12,5 µL | 1× |
| 25 × Primer-Probe Mix2 | 1 µl | 2 µl | 1× |
| Template DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | oant 25 µl | oant 50 µl | —— |
1. In definitive konsintraasje fan 0.2μM foar primers jout normaal goede resultaten;as reaksje prestaasjes is min, oanpasse primer konsintraasje binnen it berik fan 0,2-1μM as nedich.Probe-konsintraasje wurdt typysk optimalisearre binnen it berik fan 0.1-0.3μM troch gradienteksperiminten om optimale kombinaasjes te finen.
2. De kopy oantal doelwite genen befette yn ferskillende soarten sjabloanen fariearret;as it nedich is, kin gradientverdunning wurde útfierd om it optimale sjabloantafoegingsbelop te bepalen.
3. Dit systeem kin lyofilisearre wurde;as klanten brûke dit systeem sûnder freezing-droegjen easken, 4 × lyoprotectant kin selektyf tafoege wurde; as der freeze-droege produkten binne nedich, tidens floeibere reagents stadium produkt prestaasjes falidaasje, it moat tafoegje 4 × lyoprotectant te garandearjen gearhing mei de lyophilized systeem komponinten en effekten.
As it systeem wurdt brûktd foar freeze-droege, tariede de systeem as folgjend:
| Gearstalling | 25µL Reaksje Systeem |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+fergees) (DG) | 5 µl |
| 250 mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4 × lyoprotectant | 6.25µL |
| 25 × Primer-Probe Mix | 1 µl |
| ddH2O | Oant 18 ~ 20 µL |
* As oare systemen foar vriesdrogen nedich binne, rieplachtsje dan apart.
Lyofilisaasjeprosedueress
| Proseduere | Temp. | Tiid | Betingst | Druk |
| Pre-freezing | 4℃ | 30 min | Hâlde |
1 omt |
| -50 ℃ | 60 min | Cooling | ||
| -50 ℃ | 180 min | Hâlde | ||
| Primêr drogen | -30 ℃ | 60 min | Ferwaarming |
Ultimate Vacuum |
| -30 ℃ | 70 min | Hâlde | ||
| Sekundêre drogen | 25 ℃ | 60 min | Ferwaarming |
Ultimate Vacuum |
| 25 ℃ | 300 min | Hâlde |
2. It boppesteande lyofilisaasjeproses is allinich foar referinsje.Ferskillende produktsoarten en ferskate friezerdrogers hawwe ferskillende parameters, sadat oanpassingen kinne wurde makke neffens eigentlikebetingsten tidens gebrûk.
3. Ferskillende lyophilization prosessen kinne geskikt wêze foar ferskillende batch maten fan lyophilizedprodukten, sadat genôch testvalidaasje moat wurde útfierd as brûkt foar grutskalige produksje.
Ynstruksjes foar it brûken fan lyophilized poeder
1. Koarte sintrifuge it lyophilized poeder;
2. Add nucleic acid template oan it lyophilized poeder en add wetter oant 25µL;
3. Mix goed troch centrifugation en rinne op masine.
Kwaliteitsbeweitsing:
1. Funksjonele testen: gefoelichheid, spesifisiteit, reproducibility fan qPCR.
2. Gjin exogenous nuclease aktiviteit, gjin exogenous endo / exonuclease fersmoarging.
Technyske ynformaasje:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG brûkt in roman hot-start enzyme dat mooglik makket flugge hot-start binnen 1 ~ 5 minuten;troch spesjale bufferformulering is it geskikt foar multiplex fluorescent kwantitative PCR-reaksjes.
2. It hat hegere spesifisiteit dy't gâns ferbettert de gefoelichheid fan fluorescence kwantitative PCR limyt detection, meitsjen amplification curves normalization, fluorescence wearde krije dúdlik ferbettering by lege konsintraasje sjabloanen, geskikt as hege gefoelichheid fluorescence kwantitative PCR detection reagents.
3. Foar primers mei legere annealing temperatuer of langer as 200bp fragminten, 3-stap metoade wurdt oanrikkemandearre.
4. De benuttingseffektiviteit fan dUTP en gefoelichheid foar UNG-enzyme ferskille foar ferskate doelgenen, dus as it brûken fan UNG-systeem liedt ta in fermindering fan deteksje-sensitiviteit, moat it reaksjesysteem oanpast en optimisearre wurde.As technyske stipe nedich is, nim dan kontakt op mei ús bedriuw.
5. Brûk spesjale gebieten en pipetten foar en nei amplification, drage wanten by operaasje en ferfange se faak;iepenje de reaksjebuis net nei PCR foltôging om kontaminaasje fan samples troch PCR-produkten te minimalisearjen.
