DNA Extraction Mini Kit

Opslach betingsten

Bewarje by -15 ~ -25 ℃ en ferfiere by keamertemperatuer.

Components

Buffer GDP:DNA binding buffer.

Buffer GW:Washing buffer;foegje absolute ethanol ta mei it oanjûne folume op 'e flesse foar gebrûk.

Elueringsbuffer:Eluaasje.

FastPure DNA Mini Columns-G:DNA adsorpsje kolommen.

Sammelbuizen 2 ml:Sammelbuizen foar filtraat.

Tariede Materialen

1.5 ml sterilisearre buizen, absolute ethanol en isopropanol (as DNA-fragmint ≤100 bp, foegje 1 folume ta

isopropanol oan 1 folume gel), wetterbad.

Eksperimint Proses

Foegje 80 ml ethanol ta om Buffer GW te verdunnen lykas oanjûn op tag foar gebrûk, bewarje by keamertemperatuer.

Meganisme

1. PCR reaksje oplossing

Gel-ekstraksjeskema: Foegje gelikense folume Buffer GDP PCR-reaksje-oplossing herstelskema ta:Add 5 kear it folume Buffer

2. GDP Berekkenje it folume fan gel (100  μl is lyk oan 100 mg)

Gel oplosse

3. Preheat op 50 ~ 55℃

4. Bind Waskje

Foegje 300 μL buffer GDP ta*

Foegje 700 μL buffer GW ta

Foegje 700 μL buffer GW ta

5. Elute

Foegje 20 - 30μL elueringsbuffer of deionisearre wetter ta

Opmerkingen * Herstel fan PCR-reaksjefluid sûnder dizze stap

Gel ekstraksje programma

1. Nei DNA electrophoresis foar fractionating DNA fragminten, excise de single stripe fan DNA fragmint út de agarose gel ûnder UV ljocht.It is oan te rieden om absorberend papier te brûken om skynfocht fan gel op te nimmen en de grutte fan 'e gelstik te minimalisearjen troch sa mooglik ekstra agarose te ferwiderjen.Weagje de gel-slice (sûnder mikrosentrifuge-buis) om syn folume te berekkenjen: It folume fan 100 mg gelslice is sawat 100 μL, oannommen dat de tichtheid 1g / ml is.

2. Foegje gelikense folume Buffer GDP ta, ynkubearje op 50 ~ 55 ℃ foar 7-10 min (neffens de gelgrutte, oanpasse de ynkubaasjetiid oant de gel folslein oplost is).Ynvertearje de buis 2 kear tidens de ynkubaasje.

Δ Tafoeging fan 1-3 folumes fan Buffer GDP sil de effisjinsje fan DNA-herstel net beynfloedzje.As it te herstellen DNA-fragmint <100 bp, moatte 3 dielen fan Buffer GDP tafoege wurde;as de gel slice folslein oplost is, foegje 1 folume isopropanol ta en mingje goed, gean dan troch nei de folgjende stap.

3. Centrifugerje koart om it probleem nei de boaiem fan 'e buis te bringen, ynfoegje de FastPure DNA Mini Columns-G yn' e Samling Tubes 2 ml, foarsichtich oerdrage de oplossing maksimaal 700 μL ien kear in

tiid nei de filtraasje kolommen, centrifuge at 12.000 rpm (13.800 X g) foar 30-60 sek.

4. Ferwiderje it filtraat en foegje 300 μL fan Buffer GDP oan 'e kolom, ynkubearje by keamertemperatuer foar 1 min, sintrifuge by 12.000 rpm (13.800 X g) foar 30-60 sek.

5. Ferwiderje it filtraat en foegje 700 μL fan Buffer GW ta (kontrôle as absolute ethanol yn 't foarút is tafoege!) Oan' e kolom, sintrifuge by 12.000 rpm (13.800 X g) foar 30-60 sek.

Δ Foegje asjebleaft Buffer GW ta om de muorre fan 'e adsorpsjonskolom, of foegje Buffer GW-efterkant ta en mingje it ûndersteand foar 2 - 3 kear om te helpen it sâlt dat oan' e buismuorre oanhinget folslein te spoelen.

6. Werhelje stap 5.

Δ Flushing mei Buffer GW twa kear kin soargje dat it sâlt wurdt folslein fuortsmiten en elimineren de ynfloed op folgjende eksperiminten.

7. Ferwiderje it filtraat en sintrifuge de lege kolom by 12.000 rpm (13.800 X g) foar 2 min.

8. Foegje de kolom yn in skjinne 1.5 ml mikrosentrifuge-buis, foegje 20 - 30 μL fan Elution Buffer oan it sintrum fan 'e kolommembraan, ynkubearje foar 2 min, en dan sintrifugerje by 12.000 rpm (13.800 X g) foar 1 min.Ferwiderje de kolom, bewarje it krigen DNA op -20.

Δ It oerbringen fan de supernatant fan stap 8 nei de kolom om wer te elueren en de Elution Buffer foar te ferwaarmjen nei 55 (as DNA-fragmint> 3 kb) miskien nuttich om de wersteleffisjinsje te ferheegjen.

PCR produkten herstel programma

Dit protokol is fan tapassing foar it suverjen fan DNA-fragminten fan PCR-produkten, enzymatyske reaksjesysteem en oare DNA-ruwe produkten (ynklusyf genetysk DNA).Dizze oplossing kin effisjint ferwiderje ferskate nukleotiden, primers, primer dimers, sâltmolekulen, enzymen en oare ûnreinheden.

1. Koarte centrifuge PCR produkten, enzymatyske reaksje oplossing, en oare DNA crude produkten.Skatte har folume mei pipet en ferpleatse nei in sterilisearre buis fan 1,5 ml of 2 ml.Add ddH2O oant it folume oant 100 μL;wylst foar genomysk DNA mei hege konsintraasje, ferwidering nei 300 μL mei ddH2O sil helpe om de effisjinsje fan herstel te ferbetterjen.

2. Add 5 folume fan Buffer GDP, mix yngeand troch inverting of vortexing.As DNA-fragmint fan belang> 100 bp, moatte ekstra 1.5 voluminten (samples + Buffer GDP) fan ethanol wurde tafoege.

3. Foegje de kolom werom yn 'e sammelbuis, ferpleatse de mixtrue nei de kolom, sintrifuge by 12.000 rpm (13.800 × g) foar 30 - 60 sek.As it folume fan 'e mingde oplossing> 700 µL is, set de adsorpsjekolom werom yn' e sammelbuis, ferpleatse de oerbleaune oplossing nei de adsorpsjekolom, en sintrifuge by 12.000 rpm (13.800 × g) foar 30 - 60 sek.

4. De folgjende foarstelling ferwiist nei de stap 5 - 8 fan 08- 1 / Gel-ekstraksjeprogramma.