Rnase-ynhibitor (glycerolfrij)
Murine RNase inhibitor is in rekombinante murine RNase inhibitor útdrukt en suvere út E.coli.It bynt oan RNase A, B of C yn in 1: 1-ferhâlding troch net-kovalente bonding, wêrtroch de aktiviteit fan 'e trije enzymen ynhibearret en RNA beskermet tsjin degradaasje.It is lykwols net effektyf tsjin RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H of RNase fan Aspergillus.Murine RNase inhibitor waard hifke troch RT-PCR, RT-qPCR en IVT mRNA, en wie kompatibel mei ferskate kommersjele Reverse transkriptases, DNA polymerases en RNA polymerases.
Yn ferliking mei minsklike RNase-ynhibitoren befettet murine RNase-ynhibitor gjin twa cysteines dy't heul gefoelich binne foar oksidaasje dy't ynaktivaasje fan 'e ynhibitor feroarsaket.Dat makket it stabyl by lege konsintraasjes fan DTT (minder dan 1 mM).Dizze funksje makket it geskikt foar gebrûk yn reaksjes dêr't hege konsintraasjes fan DTT negatyf is foar de reaksje (bgl. Real-time RT-PCR).
Aapplikaasje
Dit produkt kin breed brûkt wurde yn elk eksperimint wêr't RNase-ynterferinsje mooglik is om RNA-degradaasje te foarkommen, lykas:
1.First-string cDNA synteze, RT-PCR, RT-qPCR, ensfh.;
2.Beskermje RNA fan degradaasje yn in-vitro-transkripsje / oersetting (bgl. virale replikaasje yn vitro);
3.Inhibysje fan RNase-aktiviteit by RNA-isolaasje en suvering.
Storage Betingsten
Bewarje by -25~-15 ℃;
Freeze-thaw-syklusen ≤ 5 kear;
Jildich foar 1 jier.
Unit definysje
Ien ienheid wurdt definiearre as de hoemannichte RNase Inhibitor nedich om de aktiviteit fan 5 ng fan RNase A mei 50% te remmen.
Molekuul gewicht
RNase Inhibitor (Glycerol-frij) is in 50 kDa proteïne.
Kwaliteitsbeweitsing
Exonuclease Aktiviteit:
Inkubaasje fan 40 U fan enzyme mei 1 μg λ-Hind III digest DNA foar 16 oeren by 37 ° C resultearre yn gjin detectable degradaasje fan it DNA lykas bepaald troch gel elektroforese.
Endonuklease aktiviteit:
Inkubaasje fan 40 U fan enzyme mei 1 μg λ DNA foar 16 oeren by 37 ° C resultearre yn gjin detectable degradaasje fan it DNA lykas bepaald troch gelelektroforese.
Nicking Aktiviteit:
Inkubaasje fan 40 U fan enzyme mei 1 μg pBR322 foar 16 oeren by 37 ℃ resultearre yn gjin detectable degradaasje fan it DNA lykas bepaald troch gelelektroforese.
RNase Aktiviteit:
Inkubaasje fan 40 U fan enzyme mei 1.6 μg MS2 RNA foar 4 oeren by 37 ℃ resultearre yn gjin detectable degradaasje fan it RNA lykas bepaald troch gelelektroforese.
E.coli DNA:
40 U fan Enzyme wurdt ûntdutsen troch TaqMan qPCR.De E.coli DNA is ≤ 0. 1pg/40U.
Notes
1.Don't skodzje of stir gewelddiedich te kommen enzyme inactivation.
2.RNase-ynhibitor is aktyf by temperatueren fariearjend fan 25 ℃ oant 55 ℃ en is ynaktivearre by ≥65 ℃.
3.De aktiviteit fan RNase H, RNase 1, en RNase T1 wurdt net ynhibeare.
4.It pH-berik foar ynhibearjen fan RNase-aktiviteit is breed (aktyf by pH 5-9), eksposearret maksimale aktiviteit by pH 7-8.
