Temperatuer Sensitive UNG
Temperatuer Sensitive UNG (TS-UNG) is in krigen troch rekombinante ekspresje yn E. coli.It enzyme katalysearret de frijlitting fan frije uracil út uracil-befette single- en dûbelstrenged DNA en is ynaktyf tsjin RNA.Yn ferliking mei de konvinsjonele UNG enzyme fan E. coli gene oarsprong, TS-UNG enzyme hat hegere aktiviteit by lege temperatueren (20 ℃ ~ 37 ℃) en is temperatuer gefoelich en maklik inactivated (50 ℃), it foarkommen fan de degradaasje fan dUTP-befette amplification produkten by keamertemperatuer troch de oerbliuwende aktiviteit dy't kin bliuwe nei ynaktivering fan it konvinsjonele UNG enzyme.Dêrom, TS-UNG enzyme is net allinnich geskikt foar PCR fersmoarging previnsje reaksje, mar ek oerienkomt goed mei de RT-PCR amplification programma en kin brûkt wurde yn RT-PCR fersmoarging previnsje reaksje.
Oanrikkemandearre applikaasje
Kontaminaasje Previnsje Amplification
Storage Condition
-20 ° C foar lange termyn opslach, moat goed mingd wurde foar gebrûk, foarkomme faak frieze-ûndooi.
Opslach buffer
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilisator, 50% Glycerol.
Unit Definition
De hoemannichte enzyme dy't nedich is om 1µg ienstrengige DNA te degradearjen mei dU-basen yn 1 oere by 37 ° C is 1 ienheid fan aktiviteit (U).
Kwaliteitsbeweitsing
1.SDS-PAGE elektroforetyske suverens grutter dan 98%
2.Degradaasjeaktiviteit, batch-to-batch kontrôle, stabiliteit
3.Gjin eksogene nuclease-aktiviteit, gjin eksogene endonuclease of exonuclease-fersmoarging.
Ynstruksjes
| Components | Volume (μL) | Finale konsintraasje |
| 10 × PCR-buffer (dNTP fergees, Mg²+frij) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ferfange dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Primer Mixin | 2 | 1× |
| Sjabloan | - | ＜1μg/reaksje |
| ddH₂O | Oan 50 | - |
Opmerking: a: As brûkt foar qPCR / qRT-PCR, moat de fluorescent sonde wurde tafoege oan it reaksjesysteem.Gewoanlik kin in definitive primerkonsintraasje fan 0,2 μM goede resultaten jaan;as de reaksje prestaasjes min is, kin de primerkonsintraasje yn it berik fan 0,2-1 μM oanpast wurde.Gewoanlik wurdt de probekonsintraasje optimalisearre yn it berik fan 0,1-0,3 μM.Konsintraasjegradienteksperiminten kinne wurde útfierd om de bêste kombinaasje fan primer en sonde te finen.
Notysjes
1.De optimale reaksje temperatuer fan TS-UNG enzyme is relatyf leech, en it kin wurde optimalisearre yn it berik fan 20 ℃ ~ 37 ℃, de dosering fan enzyme en de reaksje tiid kin wurde optimalisearre yn it berik fan 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 min;en it enzyme kin ynaktivearre wurde yn it proses fan omkearde transkripsje.
2.It is geskikt foar PCR en RT-PCR om kontaminaasje te foarkommen.
3.Foarkom faak befrieze-tooi, en bleatstelle net oan grutte temperatuerfluktuaasjes.
4.Ferskillende genen dy't moatte wurde fersterke hawwe ferskillende benutten effisjinsje fan dUTP en gefoelichheid foar UNG enzyme, dêrom, as it brûken fan UNG systeem liedt ta in fermindering fan deteksje gefoelichheid, it reaksje systeem moat wurde oanpast en optimalisearre, as jo nedich technyske stipe, nim dan kontakt op mei ús bedriuw.
