Bst 2.0 DNA Polymerase (Glycerol frij)
Bst DNA polymerase V2 is ôflaat fan Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, dy't 5′→3′ DNA-polymerase-aktiviteit en sterke ketenferfangingsaktiviteit hat, mar gjin 5′→3′ exonuclease-aktiviteit.Bst DNA Polymerase V2 is by útstek geskikt foar strand-ferpleatsing, isothermyske amplifikaasje LAMP (Loop mediated isothermal amplification) en rappe sequencing.
Components
| Komponint | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNA-polymerase V2 (glycerolfrij) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Oanfraach
1.LAMP isotermyske amplification
2.DNA strand single displacement reaksje
3.High GC gen sequencing
4.DNA-sekwinsje fan nanogramnivo.
Storage Condition
Ferfier ûnder 0 ° C en wurde opslein by -25 ° C ~ -15 ° C.
Unit Definition
Ien ienheid wurdt definiearre as de hoemannichte enzyme dy't 25 nmol dNTP yn 30 minuten by 65 ° C yn soer ûnoplosber materiaal opnimt.
Kwaliteitsbeweitsing
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):De suverens fan Bst DNA-polymerase V2 is ≥99% bepaald troch SDS-PAGE-analyse mei Coomassie Blue-deteksje.
2.Exonuclease aktiviteit:Inkubaasje fan in 50 μL reaksje mei in minimum fan 8 U fan Bst DNA polymerase V2 mei 1 μg λ -Hind Ⅲ digest DNA foar 16 oeren by 37 ℃ resultearret yn gjin detectable degradaasje lykas bepaald.
3.Nickase Aktiviteit:Inkubaasje fan in 50 μL reaksje mei in minimum fan 8 U fan Bst DNA polymerase V2 mei 1 μg pBR322 DNA foar 16 oeren by 37 ° C resultearret yn gjin detectable degradaasje lykas bepaald.
4.RNase Aktiviteit:Inkubaasje fan in 50 μL reaksje mei in minimum fan 8 U fan Bst DNA polymerase V2 mei 1.6 μg MS2 RNA foar 16 oeren by 37 ° C resultearret yn gjin detectable degradaasje lykas bepaald.
5.E. coli DNA:120 U fan Bst DNA polymerase V2 wurdt screened foar de oanwêzigens fan E. coli genomysk DNA mei TaqMan qPCR mei primers spesifyk foar de E. coli 16S rRNA locus.De E. coli genomyske DNA-fersmoarging is ≤1 Kopy.
LAMP Reaksje
| Components | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP's (10 mM elk) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Grien (25×)a | 1,0 μL |
| Primer mixb | 6 μl |
| Bst DNA Polymerase V2 (glycerolfrij) (8 U/uL) | 1 μl |
| Sjabloan | × μL |
| ddH₂O | Oant 25 μL |
Notysjes:
1) a.SYTOTM 16 Grien (25 ×): Neffens eksperimintele behoeften kinne oare kleurstoffen brûkt wurde as ferfangers;
2) b.Primermix: krigen troch it mingen fan 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB en oare folumes.
Reaksje en betingst
1 × HC Bst V2 Buffer, de ynkubaasjetemperatuer is tusken 60 ° C en 65 ° C.
Heat Inactivation
80 °C, 20 min
