2 × HiF Taq plus Master Mix
Cat No: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Met Dye) is in klear te brûken 2 × premixed oplossing mei Plus HIF DNA Polymerase, dNTP's, en optimalisearre buffer.Twa monoklonale antykladen by keamertemperatuer dy't polymerase-aktiviteit en 3′→5′-exonuclease-aktiviteit ynhibearje, wurde tafoege oan 'e mastermix foar maklik en heul spesifike Hot Start PCR.De útwreidingsfaktor wurdt tafoege oan 'e mastermix om it enzym in lange fragmintamplifikaasjekapasiteit te jaan, de lingte fan' e amplifikaasje kin oant 13 kb wêze, it enzym hat in 5′→3′ DNA-polymerase-aktiviteit en in 3′→5′ exonuklease-aktiviteit, syn trou is 83 kear dat fan Taq DNA-polymerase, dat is 9 kear dat fan gewoane DNA-polymerase.It is geskikt foar amplification fan komplekse sjabloanen, it amplification produkt is in stompe ein.
2×HIF Taq plus Master Mix (Mei Dye) hat de foardielen fan fluch en maklik, hege gefoelichheid, sterke spesifisiteit, goede stabiliteit, ensfh stapprotokol, ferienfâldigje de eksperimintele stappen en besparje tiid.Dit produkt befettet kleurstoffen foar elektrophoresisindikator, en PCR-produkten kinne direkt brûkt wurde foar elektroforese.Dêrnjonken befettet it produkt ek in spesifike beskermjende agint, sadat de mastermix stabile aktiviteit kin behâlde nei werhelle freeze-tooi.
Storage Betingsten
Produkten moatte wurde opslein by -25 ~ -15 ℃ foar 1 jier.
Spesifikaasjes
| Produkt spesifikaasje | Master Mix |
| Konsintraasje | 2× |
| Hot Start | Ynboude Hot Start |
| Overhang | Blunt |
| Reaksje snelheid | Rapid |
| Grutte (einprodukt) | Oant 13kb |
| Betingsten foar ferfier | Droech iis |
| Produkt type | High fidelity PCR premixes |
Ynstruksjes
1.PCR-reaksjesysteem
| Components | Volume (μL) |
| DNA Template | Geskikt |
| Foarút primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Reverse Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2 × HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | oan 50 |
2.Oanrikkemandearre gebrûk fan ferskate sjabloanen
| Soart sjabloan | Amplify fragminten fan 1kb oant 10 kb |
| Genomysk DNA | 50-200 ng |
| Plasmid of virale DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2.5 µL (net mear as 10% fan it definitive PCR-reaksjevolumint) |
3.Amplification Protokol
1) Twa-stap protokol (kompleksiteitssjabloan)
| Cycle stap | Temp. | Tiid | Cycles |
| Inisjele denaturaasje | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturaasje | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Útbou | 68℃ | 30 sek/kb | |
| Finale útwreiding | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Trije-stap protokol (gewoane protokol)
| Cycle stap | Temp. | Tiid | Cycles |
| Inisjele denaturaasje | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturaasje | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Annealing | 60 ℃ | 20 sek | |
| Útbou | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Finale útwreiding | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (kompleksiteitsjabloan)
| Cycle stap | Temperatuer | Tiid | Cycles |
| Inisjele denaturaasje | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturaasje | 98℃ | 10 sek | 15 (1 ℃ reduksje per syklus) |
| Gradient annealing | 70-55 ℃ | 20 sek | |
| Útbou | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Denaturaasje | 98℃ | 10 sek |
20 |
| Annealing | 55 ℃ | 20 sek | |
| Útbou | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Finale útwreiding | 72℃ | 5 min | 1 |
Funksjes ûnder ferskillende amplification protokol
| Protokol | Twa-stap | Trije-stap | Gradient annealing |
| Spec. | fluch | medium | stadich |
| Spesifisiteit | heech | medium | heech |
| PCR opbringst | medium | heech | medium |
| Detection rate | heech | medium | heech |
Notysjes
Draach asjebleaft de nedige PPE, sa'n laboratoariumjas en wanten, om jo sûnens en feiligens te garandearjen!
