Multiplex qPCR Probe Premix
Cat No: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) is in pre-oplossing foar 2 × real-time kwantitative PCR amplification karakterisearre troch hege gefoelichheid en spesifisiteit, dat is blau yn kleur, en hat it effekt fan sample tafoeging.Dit produkt is in 2 × Mix pre-mingd reagens dat maksimaal fjouwer fluorescent kwantitative PCR-reaksjes yn in inkele reaksjeput mooglik makket.Dit produkt befettet de genetysk modifisearre antykodymetoade foar it hot-start Taq-enzyme, wat de amplifikaasjesensitiviteit en spesifisiteit sterk ferbetteret.Tagelyk, dit produkt hat djip optimalisearre de multi-reaksje buffer, dat kin ferbetterje de amplification effisjinsje fan de reaksje en befoarderje de effektive amplification fan lege-konsintraasje sjabloanen.Dit produkt kin brûkt wurde foar genotyping en multiplex kwantitative analyze.
Spesifikaasje
| Hot Start | Ynboude hot start |
| Detection metoade | Primer-probe-deteksje |
| PCR metoade | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Soart sample | DNA |
Storage Betingsten
It produkt wurdt ferstjoerd mei droech iis en kin wurde opslein by -25 ~ -15 ℃ foar 2 jier.
Ynstruksjes
1. ReaksjeSysteem
| Components | Volume (μL) | Finale konsintraasje |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primermix (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Probemix (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox ferwizing kleurstof | 0.5 | 1× |
| Template DNA / cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | oant 25 | - |
Notysjes:Mingje goed foar gebrûk om oermjittige bubbels te foarkommen fan krêftich skodzjen.
in.Primerkonsintraasje: Primer Mix befettet meardere pearen primers, meastal elke primer mei in definitive konsintraasje fan 0,2 μmol / L en kin ek oanpast wurde tusken 0,1 en 0,5 μmol / L as passend.
b.Probe konsintraasje: Probe Mix befettet meardere probes mei ferskillende fluorescence sinjalen, en de konsintraasje fan elke sonde kin oanpast wurde tusken 50 en 250 nmol / L neffens spesifike situaasje.
1.Rox dye referinsje: It wurdt brûkt op Real Time PCR amplification ynstrumint lykas Applied Biosystems te korrigearjen de flater fan fluorescence sinjaal oanmakke tusken putten;dit produkt befettet gjin Rox dye referinsje.Cas # 10200 wurdt oanrikkemandearre as it nedich is.
2.Template dilution: qPCR is tige gefoelich, en it is oan te rieden om te verdunnen it sjabloan foar gebrûk.As de sjabloan is in cDNA stock oplossing, it sjabloan folume moat net mear as 1/10 fan it totale folume.
3.Reaksjesysteem: 25μL, 30μL of 50 μL wurdt oanrikkemandearre om de effektiviteit en werhelling fan doelgenamplifikaasje te garandearjen.
4.Systeem tarieding: Tariede asjebleaft yn 'e super skjinne bank, en brûk de tips en reaksje buizen sûnder nuklease residu;It is oan te rieden om de tips te brûken mei filterpatronen.Foarkom krúskontaminaasje en aerosolkontaminaasje.
2.Reaksje programma
| Cycle stap | Temp. | Tiid | Cycles |
| Initial-denaturaasje | 95 ℃ | 5 mins | 1 |
| Denaturaasje | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Annealing / Extension | 60 ℃ | 30 sek |
Notysjes:
1.Annealing / Extension: De temperatuer en tiid kinne passend oanpast wurde neffens de ûntwurpen primer Tm wearde.
2.Fluorescence sinjaal oanwinst: De fluorescence sinjaal oanwinst tiid nedich foar ferskate qPCR detection ynstruminten is oars, asjebleaft ynstelle neffens de minimale tiid limyt.De tiid fan ferskate mienskiplike ynstruminten wurdt ynsteld as folget:
20 sekonden: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Applied Biosystems 7300
32 sek: Applied Biosystems 7500
Notysjes
Draach asjebleaft de nedige PPE, sa'n laboratoariumjas en wanten, om jo sûnens en feiligens te garandearjen!
