UDG/UNG Enzymen
UDG (uracil DNA glycosylase) kin de hydrolyse katalysearje fan 'e N-glycosidic keppeling tusken de uracil basis en de sûker-fosfaat rêchbonke yn ssDNA en dsDNA.It kin maklik aerosolfersmoarging kontrolearje en is geskikt foar mienskiplike molekulêre biologysystemen lykas PCR, qPCR, RT-qPCR en LAMP.
Spesifikaasjes
| Ekspresje Host | Rekombinant E. coli mei uracil DNA glycosylase gen |
| Molekuul gewicht | 24. 8kDa |
| Purity | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Heat Inactivation | 95 ℃, 5 ~ 10 min |
| Unit Definition | Ien ienheid (U) wurdt definiearre as de hoemannichte enzyme dy't nedich is om de hydrolyse fan l μg dU-befette dsDNA yn 30 minuten by 25 ℃ te katalysearjen. |
Opslach
It produkt moat wurde opslein by -25 ℃ ~ -15 ° C foar twa jier.
Ynstruksjes
1.Tarieding fan it PCR-reaksjegemik neffens folgjende systeem
| Components | Volume (μL) | Finale konsintraasje |
| 10 × PCR-buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Leach |
| Template DNA | X | - |
| Primer 1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Oant 50 | - |
Noat: Neffens de eksperimintele easken kin de definitive konsintraasje fan dUTP oanpast wurde tusken 0,2-0,6 mmol / L, en 0,2 mmol / L dTTP kin selektyf tafoege wurde.
2.Amplification proseduere
| Cycle stap | Temperatuer | Tiid | Cycles |
| dU-befette template degradaasje | 25 ℃ | 10 min | 1 |
| UDG aktivearring, template initial denaturation | 95 ℃ | 5 ~ 10 min | 1 |
| Denaturaasje | 95 ℃ | 10 sek |
30-35 |
| Annealing | 60 ℃ | 20 sek | |
| Útbou | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Finale útwreiding | 72℃ | 5 min | 1 |
Noat: De reaksjetiid by 25 ° C kin binnen 5-10 minuten oanpast wurde neffens de eksperimintele easken.
Notysjes
1.UDG is aktyf yn de measte PCR reaksje buffers.
2.Enzymen moatte wurde opslein yn in iisbox of op in iis bad as brûkt, en moatte wurde opslein by -20 ° C fuortendaliks nei gebrûk.
3.Draach asjebleaft de nedige PPE, sa'n laboratoariumjas en wanten, om jo sûnens en feiligens te garandearjen!
