Mouse Genotyping Kit

Cat No: HCR2021A

Dit produkt is in kit ûntworpen foar de rappe identifikaasje fan mûsgenotypen, ynklusyf DNA-ruwe ekstraksje en PCR-amplifikaasjesysteem.It produkt kin brûkt wurde foar PCR-amplifikaasje direkt fan mûssturt, ear, tean en oare weefsels nei ienfâldige splitsing troch Lysis Buffer en Proteinase k.Gjin spiisfertarring, fenol-chloroform-ekstraksje of kolomreiniging, wat ienfâldich is en de tiidslinend fan eksperiminten ferkoart.It produkt is geskikt foar amplifikaasje fan doelfragminten oant 2kb en multiplex PCR-reaksjes mei maksimaal 3 pearen primers.De 2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix befettet genetysk manipulearre DNA-polymerase, Mg²⁺, dNTPs en in optimalisearre buffer systeem foar in foarsjen hege amplification effisjinsje en inhibitor tolerânsje, sadat PCR reaksjes kinne wurde útfierd troch taheakjen template en primers en rehydrating it produkt oan 1 ×.It PCR-produkt fersterke mei dit produkt hat in promininte "A" basis oan 'e 3'-ein en kin direkt brûkt wurde foar TA-kloning nei suvering.

Components

Storage Betingsten

Produkten moatte wurde opslein by -25 ~ -15 ℃ foar 2 jier.Nei thawing, Lysis Buffer kin wurde opslein by 2 ~ 8 ℃ foar koarte-termyn meardere gebrûk, en mix goed by it brûken.

Oanfraach

Dit produkt is geskikt foar mûs-knockout-analyse, transgene deteksje, genotyping ensafuorthinne.

Features

1.Ienfâldige operaasje: gjin needsaak om genomysk DNA te ekstrahearjen;

2.Wide tapassing: geskikt foar direkte amplifikaasje fan ferskate mûsweefsels.

Ynstruksjes

1.Release fan genomysk DNA

1) Tarieding fan lysate

Tissue lysate wurdt taret neffens it oantal mûsmonsters dat moat wurde lysed (weefsel lysate moat wurde taret op-site neffens de dosering en mingd yngeand foar gebrûk), en it oanpart fan reagents nedich foar in inkele stekproef is as folget:

2) Sample Tarieding en Lysis

Oanrikkemandearre weefselgebrûk

Nim in passende hoemannichte mûsweefselmonsters yn skjinne sintrifugebuizen, foegje 200μL farske weefsellysate ta oan elke sintrifugebuis, vortex en skodzje, dan inkubearje op 55 ℃ foar 30 minuten, en dan waarmje op 98 ℃ foar 3 minuten.

3) Centrifugering

Skeakelje it lysaat goed en sintrifuge by 12.000 rpm foar 5 minuten.De supernatant kin brûkt wurde as sjabloan foar PCR-amplifikaasje.As it sjabloan nedich is foar opslach, ferpleatse de supernatant nei in oare sterile sintrifugebuis en bewarje by -20 ℃ foar 2 wiken.

2.PCR Amplification

Fuortsmite de 2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix fan -20 ℃ en ûntdooije op iis, mingje op 'e kop en tariede it PCR-reaksjesysteem neffens de folgjende tabel (operearje op iis):

Noat:

a) It bedrach tafoege moat net mear as 1/10 fan it systeem, en as tefolle wurdt tafoege, kin PCR amplification wurde inhibited.

Oanrikkemandearre PCR Betingsten

Noat:

a) Annealing temperatuer: Mei ferwizing nei de Tm wearde fan 'e primer, wurdt it oanrikkemandearre om de annealing temperatuer yn te stellen op' e lytsere Tm wearde fan 'e primer +3 ~ 5 ℃.

Algemiene problemen en oplossings

1.Gjin rjochte strips

1) Oermjittich lysisprodukt.Kies de meast geskikte bedrach fan sjabloan, meastal net mear as 1/10 fan it systeem;

2) Te grut sample grutte.Dilute de lysate 10 kear en dan amplify, of ferminderje de stekproef grutte en re-lysis;

3) Weefselmonsters binne net farsk.It is oan te rieden om farske weefselmonsters te brûken;

4) Min primer kwaliteit.Brûk genomysk DNA foar amplifikaasje om de primerkwaliteit te ferifiearjen en it primerûntwerp te optimalisearjen.

2.Non-spesifike amplification

1) De annealing temperatuer is te leech en it syklusnûmer is te heech.Ferheegje de annealing temperatuer en ferminderje it oantal syklusen;

2) Template konsintraasje is te heech.Ferminderje it bedrach fan sjabloan of verdund it sjabloan 10 kear nei amplification;

3) Min primer spesifisiteit.Optimalisearje it primerûntwerp.

Notysjes

1.Om krúskontaminaasje tusken samples te foarkommen, moatte meardere sampling-ark wurde taret, en it oerflak fan 'e ark kin wurde skjinmakke mei 2% natriumhypochlorite-oplossing of nukleïnesûrreiniger nei elke sampling as werhelle gebrûk nedich is.

2.It is oan te rieden om farske mûsweefsels te brûken, en it samplingvolume moat net te grut wêze om foar te kommen dat it beynfloedzjen fan de amplifikaasjeresultaten.

3.Lysis Buffer moat faak befriezen-ûndooi foarkomme, en kin wurde opslein by 2 ~ 8 ℃ foar koarte termyn meardere gebrûk.As opslein by lege temperatuer, kin delslach foarkomme, en moat foar gebrûk folslein oplost wurde.

4.PCR Mix moat faak befriezen-ûndooi foarkomme, en kin wurde opslein by 4 ℃ foar werhelle gebrûk op koarte termyn.

5.Dit produkt is allinich foar wittenskiplik eksperiminteel ûndersyk en moat net brûkt wurde yn klinyske diagnoaze of behanneling.