Rnase Inhibitor
Murine RNase inhibitor is in rekombinante murine RNase inhibitor útdrukt en suvere út E.coli.It bynt oan RNase A, B of C yn in 1: 1-ferhâlding troch net-kovalente bonding, wêrtroch de aktiviteit fan 'e trije enzymen ynhibearret en RNA beskermet tsjin degradaasje.It is lykwols net effektyf tsjin RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H of RNase fan Aspergillus.Murine RNase inhibitor waard hifke troch RT-PCR, RT-qPCR en IVT mRNA, en wie kompatibel mei ferskate kommersjele Reverse transkriptases, DNA polymerases en RNA polymerases.
Yn ferliking mei minsklike RNase-ynhibitoren befettet murine RNase-ynhibitor gjin twa cysteines dy't heul gefoelich binne foar oksidaasje dy't ynaktivaasje fan 'e ynhibitor feroarsaket.Dat makket it stabyl by lege konsintraasjes fan DTT (minder dan 1 mM).Dizze funksje makket it geskikt foar gebrûk yn reaksjes dêr't hege konsintraasjes fan DTT negatyf is foar de reaksje (bgl. Real-time RT-PCR).
Aapplikaasje
Dit produkt kin breed brûkt wurde yn elk eksperimint wêr't RNase-ynterferinsje mooglik is om RNA-degradaasje te foarkommen, lykas:
1.Synteze fan 'e earste strân fan cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, ensfh.
2.Beskermet RNA tsjin degradaasje tidens in vitro transkripsje / oersetting (bygelyks in vitro virale replikaasjesysteem).
3.Ynhibysje fan RNase-aktiviteit by RNA-skieding en suvering.
Storage Betingsten
It produkt kin wurde opslein by -25～- 15 ℃, jildich foar 2 jier.
Opslach buffer
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT en 50% glycerol.
Unit definysje
De hoemannichte murine RNase-ynhibitor dy't nedich is om de aktiviteit fan 5ng fan ribonuclease A troch 50% te remmen waard definiearre as ien ienheid (U).
Molekulêre gewicht fan proteïne
It molekulêre gewicht fan murine RNase-inhibitor is 50 kDa.
Kwaliteitsbeweitsing
Exonuclease Aktiviteit:
40 U fan murine RNase-ynhibitor mei 1 μg λ -Hind III digest DNA by 37 ℃ foar 16 oeren jout gjin degradaasje lykas bepaald troch agarosegelelektroforese.
Endonuklease aktiviteit:
40 U fan murine RNase-ynhibitor mei 1μ g λ DNA by 37 ℃ foar 16 oeren jout gjin degradaasje lykas bepaald troch agarosegelelektroforese.
Nicking Aktiviteit:
40U fan murine RNase-ynhibitor mei 1μ g pBR322 by 37 ℃ foar 16 oeren jout gjin degradaasje lykas bepaald troch agarosegelelektroforese.
RNase Aktiviteit:
40U fan murine RNase-ynhibitor mei 1.6μ g MS2 RNA foar 4h by 37 ℃ jout gjin degradaasje lykas bepaald troch agarosegelelektroforese.
E.coli DNA:
40 U fan murine RNase-ynhibitor wurdt screened foar de oanwêzigens fan E. coli genomysk DNA mei TaqMan qPCR mei primers spesifyk foar de E. coli 16S rRNA-lokus.De E. coli genomyske DNA-kontaminaasje is ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1.Geweldige oscillaasje of stirring sil liede ta enzyme-ynaktivaasje.
2.It optimale temperatuerberik fan dit de ynhibitor wie 25-55 ℃, en It waard ynaktivearre by 65 ℃ en boppe.
3.De aktiviteiten fan RNase H, RNase 1 en RNase T1 waarden net ynhibeare troch murine RNase-ynhibitor.
4.De ynhibysje fan RNase-aktiviteit waard fûn yn in breed oanbod fan pH (pH 5-9 wiene allegear aktyf), en de heechste aktiviteit waard beoardiele op pH 7-8.
5.Sûnt ribonukleasen typysk aktiviteit behâlde ûnder denaturearjende betingsten, moat der soarch wurde nommen om denaturearjende RNase Inhibitor molekulen te foarkommen dy't kompleks binne mei in ribonuclease.Om de frijlitting fan aktive ribonuklease foar te kommen, moatte temperatueren boppe 50 °C en hege konsintraasjes fan urea of oare denaturearjende aginten foarkommen wurde.
