Wild Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase is in thermostabyl DNA polymerase út Thermus aquaticus YT-1, dat hat in 5'→3' polymerase aktiviteit en in 5' flap endonuclease aktiviteit.
Components
| Komponint | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2x1ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Storage Condition
Ferfier ûnder 0 ° C en wurde opslein by -25 ° C ~ -15 ° C.
Unit Definition
Ien ienheid wurdt definiearre as de hoemannichte enzyme dy't 15 nmol dNTP yn 30 minuten by 75 ° C yn soer ûnoplosber materiaal opnimt.
Kwaliteitsbeweitsing
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):De suverens fan Taq DNA polymerase wie ≥95% bepaald troch SDS-PAGE analyze.
2.Endonuclease Aktiviteit:In minimum fan 5 U fan Taq DNA-polymerase mei 1 μg λDNA foar 16 oeren by 37 ℃ resultearret yn gjin detectable degradaasje lykas bepaald.
3.Exonuclease aktiviteit:In minimum fan 5 U fan Taq DNA polymerase mei 1 μg λ -Hind Ⅲ digest DNA foar 16 oeren by 37 ℃ resultearret yn gjin detectable degradaasje lykas bepaald.
4.Nickase Aktiviteit:In minimum fan 5 U fan Taq DNA polymerase mei 1 μg pBR322 DNA foar 16 oeren by 37 ° C resultearret yn gjin detectable degradaasje lykas bepaald.
5.RNase Aktiviteit:In minimum fan 5 U fan Taq DNA polymerase mei 1.6 μg MS2 RNA foar 16 oeren by 37 ° C resultearret yn gjin detectable degradaasje lykas bepaald.
6.E. coliDNA:5 U fan Taq DNA-polymerase wurdt screened foar de oanwêzigens fan E. coli genomysk DNA mei TaqMan qPCR mei primers spesifyk foar de E. coli 16S rRNA-lokus.De E. coli genomyske DNA-fersmoarging is ≤1 Kopy.
7.PCR Amplification (5.0 kb Lambda DNA)- In 50 µL reaksje mei 5 ng Lambda DNA mei 5 ienheden fan Taq DNA Polymerase foar 25 syklusen fan PCR amplifikaasje resultearret yn it ferwachte 5.0 kb produkt.
Reaksje Setup
| Components | Folume |
| Template DNAa | fakultatyf |
| 10 μM Foarút Primer | 1 μl |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μl |
| dNTP Mix (10mM elk) | 1 μl |
| 10 × Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA Polymeraseb | 0,25 μL |
| Nuclease-frij wetter | Oant 50 μL |
Notysjes:
1) De optimale reaksje konsintraasje fan ferskillende sjabloanen is oars.De folgjende tabel toant it oanrikkemandearre sjabloangebrûk fan 50 µL reaksjesysteem.
| DNA | Tal |
| Genomysk | 1 ng-1 μg |
| Plasmid of virale | 1 pg-1 ng |
2) De optimale konsintraasje fan Taq DNA Polymerase kin fariearje fan 0.25 µL ~ 1 µL yn spesjalisearre tapassingen.
ReaksjeProgramma
| Stap | Temperatuer(°C) | Tiid | Cycles |
| Inisjele denaturaasjea | 95 ℃ | 5 mins | - |
| Denaturaasje | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cycles |
| Annealingb | 60 ℃ | 15 s | |
| Útbou | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Finale útwreiding | 72 ℃ | 5 mins | - |
Notysjes:
1) De earste denaturaasjebetingst is geskikt foar de measte amplifikaasjereaksjes en kin oanpast wurde neffens de kompleksiteit fan sjabloanstruktuer.As de sjabloanstruktuer kompleks is, kin de pre-denaturaasjetiid útwreide wurde nei 5 - 10mins om it earste denaturaasje-effekt te ferbetterjen.
2) De annealing temperatuer moat wurde oanpast neffens de Tm wearde fan 'e primer, dy't algemien ynsteld is op 3 ~ 5 ℃ leger as de Tm wearde fan' e primer;Foar komplekse sjabloanen, is it nedich om te passen annealing temperatuer en útwreidzje extension tiid te kommen ta effisjinte amplification.
