Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (Antibody modifikaasje) is in hot-start thermostabyl DNA polymerase fan Thermus aquaticus YT-1, dat hat in 5′→3′ polymerase aktiviteit en in 5′ flap endonuclease aktiviteit.De hot-start Taq DNA polymerase is in Taq DNA polymerase dy't wizige is troch thermolabile Taq antistoffen.Antibody-modifikaasje ferhege spesifisiteit, gefoelichheid en opbringst fan PCR.
Components
| Komponint | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5 × HC Taq Buffer | 4x1ml | 4×10 ml | 4x50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Antykodym wizige) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 ml |
Oanfraach
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 by 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 en 50% Glycerol.
Storage Condition
Ferfier ûnder 0 ° C en wurde opslein by -25 ° C ~ -15 ° C.
Unit Definition
Ien ienheid wurdt definiearre as de hoemannichte enzyme dy't 15 nmol dNTP yn 30 minuten by 75 ° C yn soer ûnoplosber materiaal opnimt.
Kwaliteitsbeweitsing
1.Endonuclease Aktiviteit:Inkubaasje fan 20 U fan enzyme mei 4 μg pUC19 DNA foar 4 oeren by 37 ℃ resultearre yn gjin detectable degradaasje fan it DNA lykas bepaald troch gelelektroforese.
2.5 kb Lambda PCR:25 Cycles fan PCR-amplifikaasje fan 5 ng Lambda DNA mei 1.25 ienheden fan Taq DNA Polymerase yn 'e oanwêzigens fan 200 µM dNTP's en 0.2 µM primers resultearret yn it ferwachte 5 kb-produkt.
3.Exonuclease aktiviteit:Inkubaasje fan in 50 µl reaksje mei in minimum fan 12.5 U fan Taq DNA Polymerase mei 10 nmol 5'-FAM oligonucleotide foar 30 minuten by 37 ℃ jout gjin detectable degradaasje.
4.RNase Aktiviteit:Inkubaasje fan 10 µL-reaksje mei 20 U fan enzyme mei 1μg RNA-transkripten foar 2 oeren by 37 ° C resultearre yn gjin detectable degradaasje fan it RNA lykas bepaald troch gelelektroforese.
5.Heat ynaktivaasje:Nee.
Reaksje Systeem
| Components | Folume |
| Template DNAa | fakultatyf |
| 10 μM Foarút Primer | 0,5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μL |
| dNTP Mix (10mM elk) | 0,5 μL |
| 5 × HC Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA Polymeraseb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Nuclease-frij wetter | Oant 25 μL |
Notysjes:
1) a.
| DNA | Tal |
| Genomysk | 1 ng-1 μg |
| Plasmid of virale | 1 pg-1 ng |
2) b.De optimale konsintraasje fan Taq DNA Polymerase kin fariearje fan 5-50 ienheden / ml (0.1-0.5 ienheden / 25 µL reaksje) yn spesjalisearre applikaasjes.
Termysk fytsprotokol
PCR
| Stap | Temperatuer(°C) | Tiid | Cycles |
| Inisjele denaturaasjea | 95 ℃ | 1-3 min | - |
| Denaturaasje | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cycles |
| Annealingb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Útbou | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Finale útwreiding | 68 ℃ | 5 mins | - |
Notysjes:
1) In earste denaturaasje fan 1 min by 95 ° C is genôch foar de measte amplifikaasjes.Foar drege sjabloanen wurdt in langere denaturaasje fan 2-3mins by 95 °C oanrikkemandearre.Mei koloanje PCR wurdt in earste denaturaasje fan 5 minuten by 95 ° C oanrikkemandearre.
2) De annealing stap is typysk 15-60 s.Annealing temperatuer is basearre op de Tm fan it primer pear en is typysk 45-68 ℃.
