Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Blue)
Cat No: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) is in pre-oplossing foar 2 × real-time kwantitative PCR amplification karakterisearre troch hege gefoelichheid en spesifisiteit, is blau yn kleur, en hat it effekt fan stekproef tafoeging tracing.De kearnkomponint Taq DNA-polymerase brûkt antykodym-hotstart om net-spesifike amplifikaasje effektyf te remmen fanwege primer-annealing tidens sample-tarieding.Tagelyk foeget de formule de befoarderjende faktoaren ta om de amplifikaasje-effisjinsje fan PCR-reaksje te ferbetterjen en de amplifikaasje fan genen mei ferskate GC-ynhâld (30 ~ 70%) lyk te meitsjen, sadat kwantitative PCR in goede lineêre relaasje kin krije yn in breed kwantitative regio.Dit produkt befettet spesjale ROX Passive Reference Dye, dy't fan tapassing is op de measte qPCR-ynstruminten.It is net nedich om de konsintraasje fan ROX op ferskate ynstruminten oan te passen.It is allinich nedich om primers en sjabloanen ta te foegjen om it reaksjesysteem te meitsjen foar amplifikaasje.
Components
Universele Blauwe qPCR Master Mix
Opslach betingsten
It produkt wurdt ferstjoerd mei iispakken en kin wurde opslein by -25 ℃ ~ -15 ℃ foar 18 moannen.By it opslaan of tarieden fan it reaksjesysteem is it nedich om sterke ljochtbestraling te foarkommen.
Spesifikaasje
| Konsintraasje | 2× |
| Detection metoade | SYBR |
| PCR metoade | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Soart sample | DNA |
| Applikaasje apparatuer | De measte qPCR-ynstruminten |
| Produkt type | SYBR premix foar real-time fluorescence kwantitative PCR |
| Oanfreegje op (oanfraach) | Gene ekspresje |
Ynstruksjes
1.Reaction System
| Components | Volome (μL) | Volome (μL) | Finale konsintraasje |
| Universele SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Foarút Primer (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 μmol/L |
| Reverse Primer (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 μmol/L |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | oant 50 | oant 20 | - |
[Opmerking]: Mingje goed foar gebrûk om oermjittige bubbels te foarkommen fan krêftich skodzjen.
a) Primer konsintraasje: De definitive primer konsintraasje is 0.2μmol / L, en kin ek oanpast wurde tusken 0.1 en 1.0μmol / L as passend.
b) Template-konsintraasje: As it sjabloan ûnferdunde cDNA-stockoplossing is, moat it brûkte folume net mear wêze as 1/10 fan it totale folume fan 'e qPCR-reaksje.
c) Template-ferdunning: It wurdt oanrikkemandearre om de cDNA-stockoplossing troch 5-10 kear te verdunnen.De optimale hoemannichte sjabloan tafoege is better as de Ct wearde krigen troch amplification is 20-30 cycles.
d) Reaksjesysteem: It wurdt oanrikkemandearre om 20μL of 50μL te brûken om de effektiviteit en werhelling fan doelgenamplifikaasje te garandearjen.
e) Systeemtarieding: Tariede asjebleaft yn 'e super skjinne bank en brûk de tips en reaksjebuizen sûnder nuklease-residu;It is oan te rieden om de tips te brûken mei filterpatronen.Foarkom krúskontaminaasje en aerosolkontaminaasje.
2.Reaksje programma
Standert Program
| Cycle stap | Temp. | Tiid | Cycles |
| Inisjele denaturaasje | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| Denaturaasje | 95 ℃ | 10 sek | 40 |
| Annealing / Extension | 60 ℃ | 30 sek★ | |
| Melting curve stage | Instrument Standerts | 1 | |
Fluch programma
| Cycle stap | Temp. | Tiid | Cycles |
| Inisjele denaturaasje | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturaasje | 95 ℃ | 3 sek | 40 |
| Annealing / Extension | 60 ℃ | 20 sek★ | |
| Melting curve stage | Instrument Standerts | 1 | |
[Opmerking]: It rappe programma is geskikt foar de grutte mearderheid fan genen, en standertprogramma's kinne wurde besocht foar yndividuele komplekse genen fan sekundêre struktuer.
a) Annealingtemperatuer en tiid: oanpasse asjebleaft neffens de lingte fan primer en doelgen.
b) Fluorescence sinjaal oanwinst (★): Stel asjebleaft de eksperimintele proseduere neffens de easken yn 'e ynstruksjes foar gebrûk fan it ynstrumint.
c) Melting curve: It ynstrumint standertprogramma kin normaal brûkt wurde.
3. Resultaat Analysis
In minimum fan trije biologyske replikaten wiene nedich foar kwantitative eksperiminten.Nei de reaksje moatte de amplifikaasjekromme en smeltkurve wurde befêstige.
3.1 Amplifikaasjekromme:
De standert amplifikaasjekromme is S-foarmich.Kwantitative analyze is meast akkuraat as de Ct wearde falt tusken 20 en 30. As Ct wearde is minder as 10, is it nedich om te verdunnen it sjabloan en fiere de test wer.As de Ct wearde is tusken 30-35, is it nedich om te fergrutsjen de sjabloan konsintraasje of it folume fan de reaksje systeem, sa as te ferbetterjen de amplification effisjinsje en soargje foar de krektens fan resultaat analyze.As de Ct-wearde grutter is as 35, kinne de testresultaten de ekspresje fan it gen net kwantitatyf analysearje, mar kinne brûkt wurde foar kwalitative analyze.
3.2 Smeltkromme:
De ienige peak fan 'e smeltkurve jout oan dat de reaksjespesifisiteit goed is en kwantitative analyze kin wurde útfierd;as de smeltkurve dûbele of meardere peaks toant, kin kwantitative analyze net útfierd wurde.De melting kromme toant dûbele toppen, en it is nedich om te oardieljen oft de net-doel peak is primer dimer of net-spesifike amplification troch DNA agarose gel electrophoresis.As it in primerdimer is, wurdt it oanrikkemandearre om de primerkonsintraasje te ferminderjen of primers opnij te ûntwerpen mei hege amplifikaasje-effisjinsje.As it net-spesifike amplifikaasje is, ferheegje asjebleaft de annealingtemperatuer, of ûntwerp de primers opnij mei spesifisiteit.
Notysjes
Draach asjebleaft de nedige PPE, sa'n laboratoariumjas en wanten, om jo sûnens en feiligens te garandearjen!
Dit produkt is allinich foar ûndersyksgebrûk!
